Créditos

Método Experimental Aplicado

Colección “Metodología de la Investigación”

Primera edición electrónica 2021

Dr. José Antonio Domínguez Hernández

Dr. José S. Tolosa Sánchez

Coordinación y compilación

UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO

MÉXICO 2021

Facultad de Estudios Superiores Iztacala, UNAM

Av. De Los Barrios 1, Colonia Los Reyes Iztacala, 54090 Tlanepantla, Estado de México

Instituto de Ciencias Aplicadas y Tecnología, UNAM

Circuito Exterior s/n, Ciudad Universitaria, 04510 Ciudad de México, CDMX

Trabajo realizado con el apoyo del Programa UNAM-DGAPA-PAPIME mediante el proyecto PAPIME PE201721

"El libro electrónico como recurso integrador de contenidos curriculares para el aprendizaje del MÉTODO EXPERIMENTAL APLICADO en la carrera de Cirujano Dentista de la FES Iztacala de la UNAM".

M.C. José Jaime Ávila Valdivieso

Coordinación editorial

FES IZTACALA

José Santos Tolosa Sánchez

Fernando Galván Toledo

Álvaro García Pérez

María Elena González Arreaga

Héctor Montes Domínguez

Lilia María Luna Rodríguez

Hilda Rojo Botello

Iris Rodríguez Trinidad

Sonia López Méndez

Iván Tello Ruíz

Agustina Salas Ortega

Aportación de contenidos

Amairani Ixchel Reyes García

Ana María Guadalupe Sánchez Manjarrez

Beatriz Adriana Becerra Badajosa

Paola Villarello Cosio

José Santos Tolosa Sánchez

José Antonio Domínguez Hernández

Edición y diseño pedagógico

Ariadna Pasarán Piña

 Lizbeth Meléndez Carrillo

Yuridia Martínez González

Concepto editorial

Roberto Contreras Villalobos

Sergio Alejandro Bernal Carmona

José Antonio Domínguez Hernández

Desarrollo Multimedia

Enrique Ruíz Velasco Sánchez

José Santos Tolosa Sánchez

Jesús Ramírez ortega

Revisión Pedagógica

Ricardo Castañeda Martínez

Gustavo de la Cruz Martínez

Revisor técnico y Publicación Web

Dora Judith Martínez Vera

Marisol Villegas Beltrán

Diseño Web

DIRECTORIO UNAM

Enrique Graue Weichers

Rector

Dr. Felipe Bracho Carpizo

Director de DGTIC

Dra. Patricia Dolores Dávila Aranda

Directora de FES Iztacala

Dr. Rodolfo Zanella Specia

Director de ICAT

© D.R. Universidad Nacional Autónoma de México (UNAM)

Avenida Universidad 3000. Ciudad Universitaria. Col. Universidad Nacional Autónoma de México. Coyoacán 04510,CDMX, México.

Dirección General de Cómputo y de Tecnologías de Información y Comunicación (DGTIC)

Circuito Exterior s/n. Ciudad Universitaria. Col. Universidad Nacional Autónoma de México. Coyoacán 04510, CDMX, México.

Facultad de Estudios Superiores Iztacala (FES Iztacala)

Av. de los barrios 1, Los Reyes Iztacala, 54090, Tlalnepantla de Baz. Estado de México, México.

Instituto de Ciencias Aplicadas y Tecnología (ICAT)

Circuito Exterior s/n. Ciudad Universitaria. Col Universidad Nacional Autónoma de México. Coyoacán 04510, CDMX, México.

Agradecimientos

La Colección Metodología de la Investigación ha sido realizada con el apoyo y recursos del proyecto PAPIME PE201721 "El libro electrónico como recurso integrador de contenidos curriculares para el aprendizaje del MÉTODO EXPERIMENTAL APLICADO en la carrera de Cirujano Dentista de la FES Iztacala de la UNAM".

Hecho en México

Presentación

El material que se presenta en este trabajo se construye a partir de las aportaciones de documentos, ideas y notas de curso que los profesores de la Carrera de cirujano dentista de la FES Iztacala de la UNAM han utilizado a lo largo de su trayectoria como personal docente de dicha institución. 

Estas aportaciones, construidas por infinidad de documentos, no necesariamente son contenidos originales dado que, debido a la nauraleza de los temas que se abordan, estos contenidos no pueden ser distintos a los que se publican en el texto original. Por tal motivo, la mayoría de las veces se recurre a fragmentos de texto que los profesores extraen de diversos documentos, que pueden ser lbros, artículos publicados, comunicaciones e incluso sitios Web que se refieren a los temas que se abordan en cada capítulo del libro electrónico que constituyen este material. 

Seremos insistentes en que los textos que aquí se incluyen, son parte del material que los profesores han utiliado a lo largo de más de quince años de trayectoria docente. Sin embargo, también hacemos énfasis en que cada fragmento de texto que se extrae o se recupera de alguna fuente externa, va acompañada de la cita correspondiente en la que se dan los créditos a cada autor del material consultado. Lo mismo ocurre con las imágenes, ilustraciones y fortografías que complementan los contenidos inlcluidos en este material de apoyo al mejoramiento de la enseñanza. 

El contenido de este material ha sido estructurado para cubrir, en la medida de lo posible, el programa de la asignatura "Metodología de la Investigación"; y se integra en formato de libro electrónico (o eBook), cuyo fin primordial es facilitar el aprendizaje de los temas que aborda. 

Para leer o acceder al contenido del libro (VERSIÓN EPUB) 

Para poder acceder al contenido de este eBook de manera óptima, es necesario descargar (de manera gratuita) un lector de libros electrónicos o eReader denominado "Kotobee Reader", lo cual se puede hacer desde el sitio web https//:www.kotobee.com.es/products/reader, en el cual se ofrece una aplicación ara diferentes versiones de sistema operativo. 

En caso de no ocntar con el lector (Kotobee Reader), la lectura se puede hacer mediante cualquier eReader. Sin embargo, es conveniente hacer saber al usuario la posibilidad de que los contenidos no se desplieguen de manera óptima, es decir, de la manera en que fueron editados para su presentación. 

Forma de navegar por el libro electrónico 

Es importante mencionar que este libro electrónico está diseñado de tal manera que el estudiante ubique claramente en qué lugar se encuentra dentro de cada tema, qué subtema forma parte o es componente de un tema principal y cómo se relaciona con los demás. 

De esta manera se conforma el índice, que puede ser navegado mediante la opción de "Capítulos" que se encuentra ubicada en la parte inferior de la pantalla en la que se despliega el libro. Dicha opción presenta un panorama general de los temas mencionados, facilitando con esto al estudiante acceder de manera rápida y clara al tema o subtema que desee consultar. Una vez que se abre el eBook, es posible visualizar de manera gráfica el contenido que se presenta en el índice; dando con ello mayor claridad a la estructura de los temas que se abordan. Esta representación gráfica se visualiza seleccionando la opcíon Esquema general del contenido que se muestra cuando se selecciona la opción Capítulos mencionada anteriormente. 

Índice

Esquema general del contenido

Introducción

Reglamento General de Laboratorio

Reacciones Antígeno-Anticuerpo Aglutinación en Serotipos

   Sesión práctica

   Glosario

   Bibliografía

Determinación de glucosa

   Sesión práctica

   Bibliografía

Biometría hemática

   Fórmula roja

   Fórmula blanca

   Sesión práctica

Pruebas de Valoración Hemostásica 

   Sesión práctica 

   Bibliografía 

Citología Exfoliativa

   Usos de la citología exfoliativa en odontología

   Técnica citológica

   Sesión práctica

   Bibliografía

Introducción

El desarrollo de este material tiene como fundamento proporcionar apoyo al programa de la Asignatura de Metodología de la Investigación, considerando para su estructuración los Objetivos Generales de la Asignatura y Terminales de la Carrera de Cirujano Dentista.

Este libro representa un compendio de información de diversas técnicas de laboratorio útiles en la formación básica del estudiante de pregrado. Por lo cual, ha sido elaborado con especial interés por profesores de la Asignatura, tomando como base los manuales de programas anteriores y tratando de darle una aplicación Odontológica; en este sentido, tiene la particularidad de contener imágenes del material y equipo con que cuenta la Asignatura.

La claridad de éste ha sido nuestra principal preocupación. Por tanto cada práctica consta de una introducción, los objetivos de la misma, recursos necesarios, metodología, valores de referencia de las diferentes determinaciones, resultados, análisis de resultados, conclusiones y bibliografía consultada.

Se espera que las técnicas de laboratorio aquí descritas sirvan para su aplicación en la práctica profesional de los futuros Cirujanos Dentistas

Reglamento general de laboratorio

Reglamento para solicitud de material y uso del mismo en el Módulo de

Instrumentación y Laboratorios I y II.

1.- Con 8 días de anticipación cada equipo de trabajo deberá solicitar un vale al laboratorista y llenarlo con los recursos que aparecen en la lista, que para tal efecto estará pegada en la ventanilla de los interlaboratorios.

2.- El vale ya lleno con los recursos necesarios para la próxima práctica (8 días de anticipación) será autorizado por los profesores.

3.- El vale debe ser entregado (8 días antes) al laboratorista, quien lo registrará en la bitácora del interlaboratorio.

4.- El día de la práctica, el alumno que hizo la solicitud, deberá dejar su credencial única otorgada por la UNAM (si es de primer ingreso, la tira de materias).

5.- El alumno al recibir el material y equipo debe revisar que esté limpio, estéril si así se requiere, completo y en buenas condiciones, si no es así, indicarlo inmediatamente al laboratorista.

6.- Si durante la práctica ocurre algún desperfecto o pérdida del material o equipo, el alumno debe indicarlo de inmediato a su profesor, para que éste a su vez lo comunique al laboratorista.

7.- Al término de la práctica el material y/o equipo se deberá entregar: limpio, completo y en las condiciones en que se recibió.

8.- El laboratorista cancelará el vale y devolverá la credencial o tira de materias.

9.- En caso de algún desperfecto, rotura o pérdida de material o equipo, el alumno debe hacer un nuevo vale por el material dañado y dejar su credencial, la cual será devuelta cuando se reponga o se repare el daño.

10.- En el caso de utilizar material contaminadocon microorganismos el alumno NUNCA LO DEBE LAVAR, se debe entregar al laboratorista, sin etiquetas, para que sea esterilizado y posteriormente lavado.

11.- Manejar muestras de sangre sólo con guantes.

12.- Depositar material punzocortante en los contenedores (agujas, bisturís, lancetas etc.).

13.- Los desechos biológicos depositarlos en bolsas (algodón, hisopos, envolturas contaminadas, jeringas, gasas, etc.).

NOTA: Por ningún motivo se prestará material o equipo sin credencial o tira de materias.

Reacciones antígeno-anticuerpo aglutinación en serotipos

6. Reacciones antígeno-anticuerpo aglutinación en serotipos

Introducción 

Existen diversos mecanismos de defensa que protegen a un individuo de microorganismos y material dañino en potencia. Algunos de éstos son células fagocitosis y ciertas sustancias químicas y enzimas son activos antes de la exposición al material extraño, incluso barreras físicas como piel. 

Estos mecanismos inmunitarios innatos o naturales no se incrementan por la exposición previa ni tampoco distinguen entre la mayoría de las sustancias ajenas. Otros mecanismos de defensa, conocidos en su conjunto como inmunidad adquirida o adaptativa, tienen componentes que son capaces de reconocer la variación en estructuras presentes en el material extraño. Por tanto, el mecanismo de defensa que se genera es capaz de eliminar de manera específica al material ofensor y además, la exposición subsecuente lleva a una respuesta inmunitaria más eficiente y efectiva.

El significado del término inmunidad (del latín inmunitas –exención de obligaciones civiles que se daba a los senadores), según se usa en la actualidad, se deriva de su empleo anterior que se refería a la exención del servicio militar o pago de impuestos.

La protección del efecto dañino de la bacteria podría transferirse a animales vírgenes (no inmunizados), mediante la inyección del suero de animales que se habían recuperado de la infección. El componente activo, conocido ahora como anticuerpo, está presente en la porción libre de células de la sangre, es decir el plasma o suero y es la base de la inmunidad humoral (humor significa líquido del cuerpo). 

Existen mecanismos de defensa que reaccionan ante la entrada de sustancias, partículas o células extrañas al organismo, en este tipo de defensa pueden participar proteínas conocidas como gammaglobulinas o anticuerpos (Ac); los cuales participan en la denominada inmunidad humoral, también participan células (leucocitos) y se le conoce como inmunidad celular. Actualmente, el término de inmunógeno se tiende adesignar toda sustancia que, inyectada al organismo, es capaz de inducir una reacción inmunitaria, sea de tipo humoral o celular. Con el término de antígeno, clásicamente utilizado, tiende a señalar la propiedad que tiene una sustancia para reaccionar específicamente con los productos de esta reacción inmunitaria, tanto anticuerpos como células linfoides. Según estos conceptos una misma molécula puede ser a la vez inmunogénica y antigénica.

Anticuerpo y antígenos 
Los anticuerpos se han designado durante mucho tiempo en función de su reacción in vitro con el antígeno, de ahí los nombres de precipitina, aglutinina, hemolisina, inmovilisina, etc. que les han sido dados. Esta antigua nomenclatura ha sido sustituida por el término de INMUNOLOBULINA, designada por el símbolo Ig.

Las inmunoglobulinas son de cinco tipos: IgG, IgA, IgE, IgM e IgD, estas proteínas reaccionan específicamente con el tipo de sustancia, partícula o célula extraña que ocasionó su formación.

Tipos de inmunoglobulinas

En cavidad oral existen inmunoglobulinas en la saliva. La Ig A es la más frecuente y se ha demostrado su actividad para aglutinar bacterias de la placa dento bacteriana.

En el surco gingival se pueden encontrar macrófagos en el líquido crevicular, mismos que participan como respuesta de inmunidad celular en procesos parodontales.

Una demostración práctica de una reacción de aglutinación es la que ocurre al determinar los grupos sanguíneos.

Los eritrocitos contienen sustancias que actúan como antígenos y el plasma, por su parte llevan anticuerpos. Cuando se unen los antígenos de un tipo con los correspondientes anticuerpos, se produce una reacción de aglutinación.

Reacción de aglutinación

En el siglo XIX, cuando se introdujeron las transfusiones de sangre, en ocasiones el paciente experimentaba una súbita reacción de hemólisis (destrucción de los glóbulos rojos), que conducía a la muerte. A comienzos del siglo XIX, el patólogo y serólogo austriaco Karl Landsteiner descubrió la aglutinación que se producía al mezclar los glóbulos rojos de un sujeto con los de otros.

Este descubrimiento demostró la existencia de tres grupos sanguíneos y se descubrió un cuarto en 1902, los cuales en la actualidad se conocen como: grupo A, grupo B, grupo AB y grupo O o grupo 0 (cero) y se reconoció una relación recíproca entre los anticuerpos del suero y los antígenos de los Eritrocitos como se observa en el siguiente cuadro:

Grupos sanguíneos

Los antígenos de grupos sanguíneos son de naturaleza proteica forman parte integrante de la membrana del glóbulo. En las pruebas de aglutinación, el antígeno se puede llamar aglutinógeno y al anticuerpo aglutinina, ocasionalmente en la reacción puede manifestarse hemólisis en lugar de aglutinación.

Representación de la hemólisis

El factor Rh es el responsable de procesos hemolíticos que se producen en personas a las que se ha sensibilizado mediante una transfusión previa. Este factor es paralelo al sistema ABO, por lo que en cada uno de los cuatro grupos de este último existe la opción de ser Rh positivo o negativo. 

Reacciones antígeno-anticuerpo aglutinación en serotipos/ Sesión práctica 

Sección práctica: Reacciones antígeno -anticuerpo aglutinación en serotipos 

Objetivo: Demonstrar una reacción inmunológica de aglutinación mediante una tipificación del grupo sanguíneo. 

1.- Etiquete una placa excavada con las letras A, en el extremo  izquierdo B, en el centro y Rh en el extremo derecho.

2.- Realizar la punción capilar. Haga antisepsia de la zona a puncionar con las torundas alcoholadas, haga presión y de una intención introduzca la punta de la lanceta. Con el objeto de causar menor molestia, haga la punción en el dedo anular.

3.- Agregue una o dos de sangre.

4.- Coloque en cada excavación el antisuero correspondiente.

5.- Con ayuda de un aplicador de madera (uno diferente para cada muestra), mezcle el suero con la sangre.

6.- Espere un máximo de tres minutos, dando la placa un suave movimiento de rotación. La presencia de aglutación indica el tipo sanguíneo del paciente y el tipo factor Rh. 

1.- Una vez interpretado el tipo sanguíneo de todo el grupo coloque los resultados obtenidos en el cuadro inferior y responda algunas preguntas.

2.- Habiendo completado el cuadro anterior, clasifique los resultados llenando esta tabla:

3.- Ahora convierta a porcentajes los datos anteriores. 

4.- En este momento dispóngase a calcular lo siguiente:

A) ¿Cuál es el tipo sanguíneo con mayor porcentaje en el sexo masculino y femenino?

B) ¿Cuál es el tipo sanguíneo con menor porcentaje en el sexo femenino y masculino?

C) ¿Cuál es el porcentaje de donantes en el grupo y qué tipo sanguíneo tienen?

D) ¿En qué porcentaje se ha presentado la hepatitis A en el grupo?

E) Con los resultados obtenidos en el inciso “a” y “b” realice una gráfica sectorial.

Con base en los resultados obtenidos y los gráficos realizados, escriba las conclusiones correspondientes.

Da clic en la imagen para acceder a una pizarra, donde podrás escribir las conclusiones de la práctica utilizando la entrada de texto, escribir con el dedo, un lápiz especial o añadir imágenes.

Reacciones antígeno-anticuerpo aglutinación en serotipos/ Glosario 

 Glosario

Haptenos: Son sustancias, generalmente de bajo peso molecular, que sólo pueden determinar la formación de anticuerpos sí previamente se unen a moléculas transportadoras de mayor tamaño, entonces reaccionan específicamente con los anticuerpos formados.   Los haptenos, no son inmunógenos por sí solos.

Anticuerpos: Son moléculas proteicas producidas por el organismo, concretamente por los linfocitos B y las células derivadas, sobre todo plasmocitos, como respuesta a un estímulo antigénico; cuando están en presencia del antígeno que los ha provocado

Los anticuerpos pueden reaccionar con los antígenos de diversas formas, algunas de ellas son:

Aglutinación.- Cuando se adhieren a células y forman conglomerados de células.

Precipitación.- Cuando un antígeno soluble se combina con el anticuerpo.

Lisis.- Cuando el anticuerpo y el complemento causa la fragmentación de las células antigénicas.

Opsonización.- Cuando una sustancia (opsoninas) es capaz de intensificar la fagocitosis.   Los anticuerpos y el complemento son las dos opsoninas principales.

Haz clic en la siguiente imagen para acceder a una serie de flash cards. En el anverso de cada tarjeta se encuentra una imagen alusiva a un concepto; al hacer clic sobre cada una de las imágenes, la tarjeta se volteará revelando la definición correspondiente.

Reacciones antígeno-anticuerpo aglutinación en serotipos/ Bibliografía 

 Bibliografía

1.- Elías Ma. del S., et.al., Transporte, Defensa y Eliminación., Ed. E.N.E.P. Iztacala, U.N.A.M., 1989.

2.- Novales X., et.al., Sistema Linfohematico., Ed. E.N.E.P. Iztacala, U.N.A.M., 1989.

3.- Matthew L., et.al., Ed. Interamericana, Mex.,D.F., 1989.

4.- Velez, A., et.al., Introducción a la Hematología, Sociedad Mexicana de Hematología, México, 1988.

Determinación de glucosa

 7. Determinación de glucosa

Introducción

La concentración de glucosa en sangre (glicemia) está determinada por el equilibrio entre la cantidad de glucosa que entra al torrente sanguíneo y la que sale de él. Los principales factores que participan en este equilibrio de la glucosa son: la ingesta dietética, la velocidad de entrada a las células musculares, al tejido adiposo y a otros órganos; así como a la actividad glucostática del hígado. El 5% de la glucosa ingerida en la dieta es rápidamente convertida en glucógeno por el hígado y del 30 al 40% en grasa. El resto es metabolizado en los músculos y otros tejidos.

Representación de glucosa en la sangre

Los carbohidratos de la dieta son, en su mayoría, polímeros de las hexosas, de las cuales las más importantes son la galactosa, la fructosa y la glucosa. El principal producto de la digestión de los carbohidratos es la glucosa además de ser el principal azúcar circulante. El nivel normal de glucosa en sangre en ayuno es de 70 a 110 mg/dl.

Una vez que penetra la glucosa en las células, es normalmente fosforilada para formar glucosa 6-fosfato. La enzima que cataliza esta reacción es la hexocinasa. En el hígado, existe además una enzima llamada glucocinasa, que tiene mayor especificidad para la glucosa y la cual es incrementada por la insulina y disminuida en la inanición y la diabetes.

Glucocinasa

Durante el ayuno, el glucógeno hepático es degradado y el hígado contribuye con glucosa al torrente sanguíneo. Cuando el ayuno se prolonga demasiado, el glucógeno se agota y se incrementa la gluconeogénesis, proceso por el cual, las moléculas distintas a la glucosa pueden ser convertidas en glucosa por la conversión del lactato en glucosa.

A la degradación de la glucosa hasta piruvato o lactato (o ambos) se le llama glucolísis. El catabolismo de la glucosa se lleva a cabo por desdoblamiento en triosas o por la oxidación y descarboxilación a pentosas.

La glucosa 6-fosfato es polimerizada en glucógeno, a este proceso se le llama glucogénesis y a la degradación del mismo, glucogenólisis.

Representacón de la glucogénesis y la glucogenólosis

La determinación de glucosa en sangre tiene gran relevancia en el diagnóstico de diversos padecimientos; sin embargo, el de mayor importancia médico-odontológico es la Diabetes Mellitus. La diabetes mellitus es una enfermedad metabólica caracterizada por la presencia de hiperglucemia resultante de un defecto en la secreción de insulina, deficiencia en la acción insulínica o en la combinación de ambas, produciendo alteraciones en el sistema que regula la utilización de carbohidratos y afectando los niveles de glucosa en sangre. A esta deficiencia contribuyen también factores ambientales, como es la obesidad, el sedentarismo, el envejecimiento y en forma importante factores genéticos.

Síntomas de la diabetes

Para mantener la tolerancia a la glucosa, el páncreas aumenta su producción de insulina, aunque los niveles más elevados de insulina mantienen los límites normales de glicemia, finalmente el páncreas termina por agotarse produciendo un aumento de glucosa hepática y como consecuencia, un aumento en ayunas, siendo el momento en que con más frecuencia se diagnostica la diabetes.

Sin embargo, mucho tiempo antes del diagnóstico, numerosos pacientes de alto riesgo tienen una intolerancia a los carbohidratos.

La importancia de detectar y tratar a las personas con diabetes es bien conocida por el impacto devastador de la misma enfermedad y sus complicaciones. Del diagnóstico acertado dependerá el tratamiento y pronóstico, y aunque el laboratorio es muy importante en el diagnóstico, debemos reconocer que la clínica sospecha, los estudios de gabinete apoyan y el laboratorio determina.

La Diabetes Mellitus es la tercera causa de muerte en nuestro país. Afecta de 5 a 10 % de la población mexicana, mientras que 10 a 20 % tiene glicemia anormal en ayuno e intolerancia a la glucosa, de esta manera se estima que aproximadamente 5 millones de mexicanos son diabéticos y un millón de pacientes aún no han sido diagnosticados.

Las evidencias en la última década han demostrado la conveniencia y la necesidad del control estricto de la glicemia, de la glicosilación de las proteínas, de la tensión arterial y de los lípidos en el diabético con la finalidad de reducir la magnitud y el impacto de las enfermedades crónico-degenerativas asociadas, incluyendo retinopatías, cataratas, insuficiencia renal, infarto agudo del miocardio, accidente cerebral vascular, etc. Dichos trastornos producen una amplia gama de manifestaciones clínicas, sistémicas y bucales, que pueden variar desde simples en un diabético bien controlado, hasta graves en pacientes sin control.

La Diabetes Mellitus tipo 1 se caracteriza por la destrucción de las células β pancreáticas y deficiencia severa de insulina; la enfermedad por lo general afecta a pacientes antes de los 30 años y corresponde a estos pacientes presentar clásicamente menos del 1% del contenido normal de la insulina pancreática y una baja concentración de insulina en el suero durante el ayuno, que es estimulada poco o nada por la ingestión de glucosa. En estos casos se caracteriza la gran frecuencia de daño en diferentes órganos.

Diabetes Tipo 1 

El control de la glicemia requiere casi siempre de la administración de insulina. Una de las manifestaciones clínicas menos comprendida es el cambio de la membrana basal celular que conduce a su engrosamiento, sobre todo en vasos pequeños (microangiopatía y en el glomérulo renal, membrana formada por una red fibrilar de proteínas, glicoprotéinas) relacionadas con la colágena, se distingue de ésta por la presencia de manosa, hexosaminas, ácido siálico y mucosa, además de glucosa y galactosa que se encuentran en la colágena. La biosíntesis de esta proteína es similar a la colágena, en la que se requieren hidroxilaciones postribosomales y adición de azúcares, estas cadenas glicosídicas extras alteran el empaquetamiento normal de las fibras proteicas provocando su engrosamiento. Si se administra insulina en las etapas iniciales, los cambios se revierten, de ahí el valor diagnóstico de la determinación de la Hemoglobina glicosilada.

Crecimiento de la membrana basal durante la diabétes

La Diabetes Mellitus Tipo 2 empieza en la edad adulta, después de los 40 años. En el 80% de los casos hay un exceso de peso corporal con respecto a los valores normales, siendo más frecuente en mujeres. A fin de verificar una adecuada compensación, el diabético deberá realizarse un perfil glicémico; esto es la determinación de glicemias capilares pre y postprandiales durante el día a fin de obtener la media aritmética que nos deberá dar entre 150 a 199 mg/dl. para considerar un buen ajuste metabólico.

Actualmente la determinación de hemoglobina glicosilada (glucohemoglobina) en sus tres formas HbA1a, HbA1b y HbA1c, refleja en los diabéticos su control en los 3 últimos meses. La hiperglicemia en el diabético por lo general es causa del aumento de esta fracción, siendo esta última la que se glicosila gradualmente a lo largo de 120 días de tiempo de vida del eritrocito y forma la porción más grande de las tres fracciones. La cantidad de hemoglobina glicosilada que se encuentra y almacena en los eritrocitos depende de la cantidad de glucosa disponible.

Diabetes Tipo 2

La diabetes del embarazo se refiere a la aparición transitoria de glucosuria o a la existencia de una tolerancia anormal a los azúcares durante el embarazo.

Las manifestaciones orales en pacientes diabéticos están íntimamente relacionadas con la concentración aumentada de glucosa en la saliva, la disminución de la secreción salival y una disminución en el pH de la misma, favoreciendo la acción proteolítica de los microorganismos, dando como resultado una gran variedad de alteraciones, como la caries dental, enfermedades periodontales, movilidad dentaria, perdida de soporte óseo, profundidad de sondeaje, sialosis, xerostomía, disgeusia, candidiasis, padecimientos dermatológicos, etc.

Determinación de glucosa/ Sesión práctica 

 Sesión práctica: Determinación de glucemia con One Touch

Objetivos:

Correlacionar los resultados de la prueba con los datos obtenidos en ayuno y posprandial y emitir un juicio diagnóstico.​​

Realizar las determinaciones de glucosa en sangre por medio de la técnica de glucómetro (One touch)

​​​​​​

A) A un alumno por equipo, le harán su historia clínica completa.

B) Le realizarán determincación de glucosa en ayuna con el One touch.

C) Desayunará y dejará pasar 2 horas.

D) Le realizarán determinación de glucosa pospandrial con el One touch.

E) Se correlacionarán sus resultados con su historia clínica. 

1.- Encienda el medidor de glucosa One touch.

2.- Si el número que aparece en pantalla es el mismo que figura en el envase de tiras reactivas en uso, puede iniciar el análisis.

3.- Para cambiar el código presione y selte el botón C, presionando el botón C haga coincidir el número de código de la pantalla con el número de código del envase de las tiras reactivas en uso.

4.- Presione el botón Encendido/ Apagado y después de que aparezca la palabra PONGA introduzca a continuación una tira reactiva.

5.- Realice asepsia en el dedo o en el lóbulo de la oreja con una torunda alcoholada.

6.- Realice la punción con la lanceta que previamente le puso al dispositivo automático.

7.- Aplique la gota de sangre sobre la tira, el resultado aparecerá 45 segundos después.

8.- Correlacione los resultados con la historia clínica. 

Determinación de glucemia con One touch/ Bibliografía 

 Bibliografía

1.- The Expert Committee on the Diagnosis and Classification of Diabetes Mellitus. Report of the Expert Committee on the Diagnosis and Classification of Diabetes Mellitus. Diabetes Care 2000;23(suppl 1):S4-S19

2.- Mc Cance DR, Hanson RL, Pettitt DJ, Benett PH, Hadden DR, Knowler WC. Diagnosing diabetes mellitus: do we need new criteria? Diabetologia 1997;40: 247-255

3.- McPhee, S. et al. Fisiopatología Médica. Tercera edición en español . Ed. El Manual Moderno. México 2001

4-. Ganong,W. Fisiología Médica. 18a. edición en español, traducida de la 2a. edición en Inglés. Editorial El Manual Moderno S. A. de C. V. México 2002, pp. 311-321.

5.- Pacheco, D. Bioquímica Estructural y Aplicada a la Medicina. Instituto Politécnico Nacional SEP. Segunda Reimpresión 2001. pp. 2884-339

6-. Harrison. Principios de Medicina Interna. 13 a. Edición Ed. Interamericana pp. 2282-2305

7-. Los nuevos criterios internacionales para el diagnóstico de diabetes mellitus. Revista Mexicana de Patología Clínica. Vol. 49 Núm.4 pp212-220 Octubre- Diciembre 2002.

8.- Diagnóstico y clasificación de la diabetes mellitus, conceptos actuales. Artículo de revisión. Revista de Endocrinología y Nutrición Vol. 10, No.2 Abril Junio 2002. pp 63-68

9-. La diabetes mellitus y su detección temprana. Revista hospital general Dr. Manuel. Gea González. Vol. 5 nos. 1 y 2 Enero-marzo 2002 Abril Junio 2002 pp.5-6

10-. The Expert Committee on the Diagnosisi and Classification of Diabetes Mellitus. Report of the Expert Committee on the Diagnosisi and Classification of Diabetes Care 1977; 20. 1183-1197

Biometría hemática

 8. Biometría hemática

Introducción 

La Biometría Hemática (BH) es una serie de determinaciones claves en el diagnóstico de enfermedades hematológicas e incluso en algunas no hematológicas. Una biometría hemática nos aporta gran cantidad de información tanto cuantitativa como cualitativa.

Dentro de la patología de la serie roja, una de las condiciones más importantes y más frecuentes es la anemia. Aparte de los datos clínicos, el diagnóstico se establece al encontrar un valor de hemoglobina por debajo del esperado para la edad, el sexo y la altura sobre el nivel del mar a la que vive el paciente. Sin embargo, el estudio no acaba ahí, pues debe recordarse que existe una gran variedad de causas de anemia y que cada una de ellas tiene su propio tratamiento.

La amplia variedad de dichas manifestaciones obliga al cirujano dentista a conocer no solamente los padecimientos que traen como consecuencia alteraciones en los elementos formes de la sangre, sino las determinaciones hemáticas necesarias para su significado diagnóstico.

Objetivos

1.- Realizar las pruebas correspondientes a fórmula roja.

2.- Realizar las pruebas correspondientes a fórmula blanca.

3.- Interpretar los resultados de laboratorio y correlacionarlos con los datos clínicos de los padecimientos hematológicos que se presentan con mayor frecuencia en la práctica odontológica.

La biometría hemática consta de dos grupos de pruebas:

iometría hemática/ Sesión práctica 

Sesión práctica: Biometría hemática - fórmula roja

Para la realización de estas dos pruebas, es necesario la obtención de una muestra de sangre.

El método de obtención de la muestra puede influir considerablemente en los resultados de dichas pruebas (fórmulas). Para lograr una exactitud máxima en los resultados, es importante evitar la contaminación accidental de la muestra con substancias que no existan en el plasma, inhibir eficazmente el mecanismo de coagulación y conservar en forma adecuada los factores lábiles El paciente deberá estar en ayunas.

Es muy recomendable, seguir el siguiente método de obtención:

1. Escoja una vena adecuada y visible, aplique el torniquete de tal modo que la vena quede fija y la pueda puncionar con facilidad, efectúe asepsia con torundas alcoholadas.

2. Efectúe la punción venosa con rapidez y sin hacer movimientos de exploración con objeto de obtener una muestra exenta de tromboplastina tisular.

3. Aspire la sangre lo más rápidamente posible, sin que se formen espuma o burbujas de aire (es conveniente usar jeringas de plástico desechable, pues su émbolo muy ajustado evitará que la sangre forme burbujas).

4. Retire la aguja de la jeringa, apoyando la punta de esta contra la pared de un tubo de ensayo con anticoagulante y deje que la sangre se deslice por la misma. Enseguida invierta este suavemente 4 o 5 veces para mezclar por completo la sangre y el anticoagulante, con objeto de inhibir los más pronto posible el mecanismo de coagulación.

Se pueden usar diversos anticoagulantes, es indispensable hacer notar que la relación sangre-anticoagulante debe ser exactamente en la proporción 9:1, ya que la cantidad de calcio que habrá de añadirse después para realizar otras pruebas está calculada para neutralizar una cantidad exacta de anticoagulante

En caso de no ser utilizado inmediatamente, conserve el plasma frío y efectúe la prueba antes de que haya transcurrido de 1 a 4 horas (según la prueba de que se trate), desde la obtención de la muestra.

La sola iniciación del mecanismo de coagulación puede alterar la determinación de los factores de la coagulación.  Las condiciones que tienden a iniciar ésta son: mezcla inadecuada o tardía de la sangre con el anticoagulante, contaminación con la tromboplastina tisular, destrucción de plaquetas, material de vidrio sucio, hemólisis y formación de espuma o burbujas.

I. VELOCIDAD DE SEDIMENTACION ERITROCITARIA (VSE ó VSG)

Tome sangre del tubo o frasco con una pipeta Pasteur y transferirla a un tubo de Wintrobe. Llénelo hasta la marca de "0”, (debe procurar que al vaciar la pipeta la punta de esta quede al fondo del tubo e ir vaciando la sangre suavemente, al mismo tiempo que se va retirando la pipeta del fondo).

Lleve el tubo de Wintrobe a la gradilla e inicie el conteo de tiempo, dejando reposar la sangre durante una hora.

Transcurrido el tiempo, mida el espacio que ocupa el sobrenadante, desde la superficie hasta el borde superior de los eritrocitos sedimentados, la lectura se hace en mm.

Parámetros normales para la ciudad de México

En el hombre 0-7 mm/hora

En la mujer 0-15 mm/hora

Nota: Aproveche el tiempo de reposo de la VSE, para realizar las siguientes pruebas.

II. RECUENTO TOTAL DE ERITROCITOS

La cantidad total de eritrocitos se relaciona directamente con las necesidades fisiológicas y/o patológicas del individuo.

Las alteraciones orgánicas también modifican los valores normales pudiendo estos aumentar o disminuir.

En estado normal la cantidad de eritrocitos en un individuo varía dependiendo de la altitud en relación al nivel del mar, de la actividad física, el clima, estado nutricional, el sexo, la edad, etc...

Los procesos patológicos en donde se modifican los valores normales en el número de eritrocitos ya sea aumentándolo ó disminuyéndolo se conocen como policitemia y anemia respectivamente.

Técnica a realizar:

La determinación del número de eritrocitos se puede hacer de dos maneras:

A. MÉTODO INDIRECTO: Se hace a partir del hematocrito, utilizando la siguiente fórmula:

Hematocrito x 100,000 = No. total, de eritrocitos por mm3

B. MÉTODO DIRECTO: Se hace un conteo directo sobre la cámara de Newbauer, aplicando los siguientes procedimientos:

1. Con la pipeta de Thoma para glóbulos rojos, aspire sangre contenida en el tubo.  Procure hacer la aspiración suavemente hasta la marca de 0.5 asegurándose de que la columna de sangre no tenga burbujas.  Una vez teniendo el volumen requerido limpie la punta de la pipeta con papel NO absorbente.

2. Aspire solución salina isotónica hasta la marca superior 101, en caso de pasarse puede eliminar  líquido con una servilleta para tener con exactitud el volumen requerido.

3. Retire la boquilla y tape la pipeta con los dedos anular y pulgar colocándolos en los extremos, agite suavemente durante dos minutos aproximadamente.

4. Posteriormente, coloque la pipeta en posición vertical para derramar dos gotas y en seguida deposite sobre las regiones biseladas de la cámara de Neubauer, a las que previamente les habrá colocado un cubreobjetos y deposite la pequeña gota observando que se difunda hasta las zonas correspondientes del rayado.

5. Inmediatamente después, coloque la cámara de Neubauer sobre la platina del microscopio y déjela reposar durante 3 minutos. Una vez transcurrido este tiempo, proceda a hacer la observación.

Primero con el objetivo de 10x (seco débil) se procede a enfocar la preparación y localizar el rayado correspondiente para la cuenta de los eritrocitos; una vez hecho esto se enfoca con el objetivo de 40x(seco fuerte) y cuente el número de eritrocitos que se encuentren en los cuadros que indica el siguiente esquema:

Para calcular los eritrocitos por mm3 se hace lo siguiente:

El total de eritrocitos contados en los 5 cuadros se suma y multiplica por 10,000. El resultado será igual al número de eritrocitos por mm3.

Parámetros normales para la ciudad de México:

Hombres 5 - 6 millones/mm3

Mujeres 4 - 5 millones/mm3

III. HEMATOCRITO (Hto)

El hematocrito (Hto.) es el porcentaje de la sangre constituido por eritrocitos y su valor normal es de 45% en un sujeto sano, este valor se correlaciona únicamente con la determinación de eritrocitos y hemoglobina para determinar la presencia de anemia o policitemia.

Se lleva a cabo por medio de la técnica de microhematocrito la cual consiste en lo siguiente: 

1. Recoja sangre por medio de un capilar, ya sea por punción ó bien de un tubo de ensaye que la contenga con anticoagulante, el capilar se llena aproximadamente en 3/4 partes de su longitud total, inclinándolo para acelerar su llenado.

2. Enseguida, tape uno de sus extremos con plastilina y limpie el exceso de sangre.

3. Coloque en la microcentrifuga, con el extremo lleno de plastilina contra el empaque de hule que se encuentra alrededor de la microcentrifuga, coloque la tapa y haga funcionar la centrífuga durante 7 minutos a una velocidad de 5000 r.p.m.

4. Valore el microhematocrito como el porcentaje de toda la sangre venosa ocupada por los eritrocitos e interprete utilizando el siguiente procedimiento:

a) Con una regla mida desde la superficie de separación de plastilina-eritrocitos hasta el menisco del plasma, dicha medición se toma como el 100%, después mida la proporción globular y determine el porcentaje que le corresponde a está (el volumen de leucocitos NO se considera parte del paquete).

Para cualquier muestra, esta medida debe de ser posible de reproducir con un error de + - 1 mm.

IV. DETERMINACIÓN DE HEMOGLOBINA (Hb)

La hemoglobina es una proteína dentro del eritrocito, encargada de combinarse en forma reversible con el oxígeno llevándolo desde los pulmones a todas las células, favoreciendo así los procesos de oxidación y con ello la formación de energía. A su vez recibe el CO2 formado por los procesos de oxidación intracelular y lo lleva a los pulmones para ser desechado al medio ambiente.

Molécula de hemoglobina 

Se lleva a cabo por medio de la técnica de Cianometahemoglobina, la cual se procede como se indica a continuación:

1. Con una pipeta de Shalli (previa colocación de la boquilla), aspire la sangre contenida en el tubo, hasta la marca de 20 cm. 

2. La sangre contenida en la pipeta debe depositarla en un tubo de ensaye que contenga 5 ml. de ferrocianuro de potasio y solución de cianuro de potasio (reactivo de Drabkin), procure que esta mezcla quede homogénea.

3. Deje reposar por espacio de 10 minutos, obteniéndose así la cianometahemoglobina.

4. La densidad óptica de este pigmento es medida posteriormente en el espectrofotómetro Spectronic 20 a 540 nm y multiplique el valor obtenido por el factor ( 37.7) que se obtiene de la curva estándar correspondiente al reactivo.

Parámetros normales en adultos para la ciudad de México.

En el hombre es de 15 a 20 g/100 ml.

En la mujer 12.5 a 17.5 g/100 ml.

V. ESTUDIO MORFOLÓGICO (FROTIS)

En el campo hematológico los frotis pueden ser sanguíneos ó medulares, los primeros proporcionan una descripción estática, morfológica y cromática de los eritrocitos, cantidad de reticulocitos en proporción a los eritrocitos y cuenta diferencial de leucocitos.

Técnica a realizar:

Posteriormente el frotis se deja secar a temperatura ambiente durante 25 minutos.

Una vez colocada la gota, utilice el borde de un segundo portaobjetos, en un ángulo aproximado de 45o y se procede a extender la gota de sangre a todo lo largo del primer portaobjetos, procurando que el movimiento sea uniforme y de una sola intención.

Coloque una pequeña gota de sangre (extraída por punción u obtenida del tubo que contiene sangra con anticoagulante), en un extremo del portaobjetos, previamente limpio y desengrasado.

TINCIÓN DEL FROTIS

Coloque el portaobjetos (con el frotis ya hecho) sobre el puente de tinción.

Cubra completamente toda la extensión del frotis con gotas de colorante de Wright, dejándolo actuar por 2 minutos, el alcohol metílico de la solución de este colorante fijará la extensión.

Agregue una cantidad igual de buffer aproximadamente a la del colorante de Wright, de esta forma se logra una dilución al 50%. Espere 10 minutos.

Enjuague con gotas de buffer la preparación, hasta que la zona más delgada del frotis tome una coloración rosa.

Deje secar la preparación a temperatura ambiente.

OBSERVACIÓN MICROSCÓPICA

Una vez seca la preparación, colóquela sobre la platina del microscopio, haciendo la observación microscópica con los tres objetivos (10x,40x,100x).

Seleccione el área delgada del frotis, en donde las células están en contacto estrecho, pero no superpuestas; de otra manera puede modificarse la morfología del eritrocito y no se podrán proporcionar datos importantes para la identificación de enfermedades importantes que dan alteraciones singulares en la célula hemática.

VI. ÍNDICES GLOBULARES MEDIOS

Para la clasificación y diagnóstico de las anemias es útil conocer el volumen de los eritrocitos

Este se obtiene con los resultados de las pruebas anteriores y desarrollando las fórmulas correspondientes para cada caso.

A) Volumen Globular Medio (V.G.M.)

Para la clasificación y diagnóstico de las anemias es útil conocer el volumen de los eritrocitos.

El aumento del volumen normal indica una macrocitósis ó megalocitósis según el caso; de lo contrario una microcitósis que en igual forma indica irregularidad y por lo tanto anemia.

Cálculo:

Es el promedio del volumen del eritrocito y se obtiene, multiplicando el hematocrito por 10 entre la cantidad resultante de la cuenta de los eritrocitos.  El resultado se expresa en micras cubicas (1).

Parámetros normales para la ciudad de México.

De 80 - 120 3 en ambos sexos.

Nota: La referencia utilizada será de la cuenta directa de eritrocitos expresados en millones por mm3.

B) Hemoglobina Globular Media (Hb.G.M.)

Es el cálculo matemático cuya finalidad será determinar la cantidad promedio en peso de hemoglobina en el eritrocito, con lo cual debe corresponder a 1/3 del volumen total del mismo.  Sabiendo que un aumento ó disminución de mas ó menos del 5% nos habla de hipo ó hipercromatismo eritrocitario. Es de ayuda diagnóstica más específica y complementaria que la cuenta de eritrocitos, hemoglobina y hematocrito.

Cálculo:

Se obtiene multiplicando el valor de la hemoglobina por 10 y dividiendo entre el total de eritrocitos. El valor resultante se da en microgammas.

Parámetros normales para la ciudad de México

Aproximadamente 30 microgammas

C) Concentración de Hemoglobina Globular Media (C.Hb.G.M.)

Ss el porcentaje promedio de hemoglobina por el volumen de células y se puede expresar también en gramos por cada 100 ml. Con este cálculo obtenemos un estudio más detallado de la cantidad de hemoglobina por una cantidad determinada de eritrocitos, dato que nos es útil para diferenciar el tipo de hipocromia e hipercromia a la anemia ya determinada.

Cálculo:

Se obtiene multiplicando la cantidad de hemoglobina por 100 entre el valor del hematocrito.

El resultado obtenido se puede expresar también en gramos por 100 ml. de eritrocitos.

Parámetros normales para la ciudad de México: 

33 % 6 3 %

RESUMEN DE VALORES NORMALES EN LA FÓRMULA ROJA PARA INDIVIDUOS ADULTOS SANOS EN LA CIUDAD DE MÉXICO

Análisis y discusión de resultados 

Da clic en la imagen para acceder a una pizarra, donde podrás escribir los resultados de la práctica utilizando la entrada de texto, escribir con el dedo, un lápiz especial o añadir imágenes; además de poder utilizar la calculadora incluída. 

Conclusiones 

Da clic en la imagen para acceder a una pizarra, en la cual podrás anotar las conclusiones de la práctica o añadir imágenes. 

Biometría hemática/ Fórmula blanca| Determinaciones

Fórmula blanca 

Determinaciones 

Esta serie consta de las siguientes determinaciones:

- Recuento total de leucocitos

- Recuento diferencial y absoluto de leucocitos por mm³

RECUENTO TOTAL DE LEUCOCITOS

Antecedentes.

Los leucocitos son células sanguíneas que realizan funciones de defensa orgánica conocidas como inespecíficas o específicas.

Hablamos de la primera en caso de inflamación, como un mecanismo de defensa en la mayoría de los casos y en la segunda en respuestas inmunológicas que determinan un fortalecimiento del huésped. Este tipo celular desarrolla funciones que mantienen la integridad del organismo. Para su estudio más detallado se les han clasificado en base a diversos criterios:

Por presentar o carecer de granulaciones en su citoplasma, se les clasifica en:

Sin embargo, con coloraciones adecuadas y a través de los estudios con microscopio electrónico se ha visto que los agranulocitos también tienen granulaciones siendo a veces resultado de una manifestación patológica.

Por su núcleo se les ha dividido en: MONONUCLEARES o POLIMORFONUCLEARES, incluyéndose entre los primeros a los:

Linfocitos y Monocitos y en los segundos a los: Neutrófilos, Basófilos y Eosinófilos, éstos últimos llamados así por la afinidad tintorial de sus granulaciones. Debe aclarase que los mononucleares pueden presentar en ocasiones sus núcleos lobulados y que los polimorfonucleares pasan normalmente por una fase donde los núcleos no muestran lobulaciones.

FUNCIONES LEUCOCITARIAS:

Biometría hemática/ Sesión práctica 

Sesión práctica: Biometría hemática - fórmula blanca

I.- OBTENCIÓN DE LA MUESTRA DE SANGRE

 A cada uno de los sujetos de la sesión anterior se les extraerán 5 ml. de sangre venosa. Con los cuidados y requerimientos de la sesión anterior. 

Una vez retirada la aguja de la jeringa, transferir la muestra obtenida al frasco o tubo que contenga el anticoagulante.

Invertir el frasco o tubo de 4 a 5 veces, con el fin de homogeneizar la sangre con el anticoagulante.

II. RECUENTO TOTAL DE LEUCOCITOS POR mm3

Técnica a realizar:

1. Coloque la boquilla a la pipeta de Thoma para glóbulos blancos y aspire sangre (del tubo que la contiene) hasta la marca de 0.5, saque la pipeta y se limpia con  un papel NO absorbente por el exterior.

2. Proceda a introducir la pipeta en el frasco que contiene el líquido de TURCK y aspire lentamente hasta la marca 11.

3. Retire la boquilla y con los dedos anular y pulgar (colocados en los extremos de la pipeta) agite la pipeta suavemente por espacio de 2 minutos.

4. Pasado este tiempo, coloque la pipeta en posición vertical dejando salir 2 gotas, la tercera gota se descargará en la cámara de Neubauer cuidando de que entre el líquido necesario para llenar el espacio rayado. No olvide colocar el cubreobjeto ANTES de descargar la gota.

5. Coloque la cámara sobre la platina del microscopio y déjela reposar por 3' para que sedimente antes de proceder a hacer su observación microscópica

6. Transcurrido el tiempo, enfoque la preparación con el objetivo de 10x, en el rayado correspondiente a glóbulos blancos.

Cálculo:

El número de leucocitos por mm3 se obtiene multiplicando por 50 el total de leucocitos contados. Este factor (50) proviene de aplicar la siguiente fórmula:

NOTA: Variará apenas se cambie la dilución y/o el número de cuadros contados.

III. RECUENTO DIFERENCIAL DE LEUCOCITOS.

El recuento diferencial de leucocitos consiste en reconocer y valorar las proporciones de las distintas variedades de leucocitos que se observan en sangre periférica, así como el estudio de las células inmaduras que puedan aparecer en ella.

Se realiza mediante la elaboración de un frotis sanguíneo que, se considera una fotografía instantánea de la sangre en el momento de la toma.

Gracias a esta técnica se pueden observar los leucocitos maduros, inmaduros ó atípicos, si presentan granulaciones tóxicas ó vacuolizaciones y sí su número corresponde al recuento leucocitario.

Como los datos de la fórmula diferencial se expresan en cifras porcentuales; por ejemplo, al contar 100 células leucocitarias si se encuentran aumentados los linfocitos se observarán disminuidos proporcionalmente los segmentados y esta disminución puede no ser real. Para evitar este tipo de error deben reportarse las cifras relativas en forma absoluta, es decir, por mm3, obteniéndose así datos que corresponden más a la realidad.

Técnica a realizar:

Colocar el frotis sanguíneo (elaborado en la primera sesión) sobre la platina del microscopio para hacer la observación correspondiente. Enfocando directamente con el objetivo de 100x (inmersión).

NOTA: Consulte el esquema al frente del salón para realizar correctamente el  conteo y anote los resultados en el cuadro correspondiente.

Cuente 100 leucocitos siguiendo el procedimiento del esquema anteriormente descrito y anote el número respectivo de neutrófilos, eosinófilos, basófilos, linfocitos y monocitos que se observen en el frotis, obteniendo así los respectivos valores porcentuales.

Para obtener cifras absolutas transforme las cifras porcentuales de cada tipo de leucocito tomando en consideración el número total de leucocitos como el 100%.

Parámetros normales 

Los parámetros normales o valores normales de la serie blanca, para la Ciudad de México son:

Análisis y discusión de resultados

Da clic en la imagen para acceder a una pizarra, donde podrás escribir los resultados de la práctica utilizando la entrada de texto, escribir con el dedo, un lápiz especial o añadir imágenes; además de poder utilizar la calculadora incluída.

Conclusiones

Da clic en la imagen para acceder a una pizarra, en la cual podrás anotar las conclusiones de la práctica o añadir imágenes.

Dibuje las células observadas a: 10x, 40x y 100x 

Da clic en la siguiente imagen para acceder a una pizarra en la que podrás realizar tus dibujos, o bien subir una imagen de los mismos. 

Biometría hemática/ Bibliografía 

 Bibliografía

1.-. Baez Villaseñor J., Hematologia Clinica., Ed. Mendez Oteo, México, 1973.

2.- Benington., Laboratorio en el diagnostico clínico. Ed. La Prensa Médica Mexicana., México, 1976.

3.- Gilberto Angel., InterpretacionDiagnostica del Laboratorio Clínico., Nueva Editorial Interamericana. México.1978.

4-. Hilman Roberts, et.al., Manual de Hematología., 3a. ed., Ed. El Manual Moderno. México, 1980.

5.- Laurence., Métodos de Laboratorio., Ed Interamericana., México., 1976.

6-. Linch., Métodos de Laboratorio., Ed. Interamericana., México., 1976.

Pruebas de valoración hemostásica

 9. Pruebas de valoración hemostásica 

Introducción 

La hemostasia es el proceso por medio del cual se evita la pérdida de sangre; los requerimientos para una hemostasia normal incluyen un sistema vascular eficaz, un número normal de plaquetas y el mecanismo de coagulación eficiente. La alteración en el balance de estos componentes tiene como consecuencia trastornos en la hemostasia.

El proceso de la hemostasia se divide en 3 partes:

Fase vascular, fase plaquetaria y fase bioquímica (plasmática), las cuales se llevan a cabo simultáneamente cuando es producida una lesión.

Vitamina K- actúa como coenzima en las reacciones que involucran los factores II, VII, IX y X.

La fase bioquímica comprende una serie de reacciones a las cuales se les ha llamado “mecanismo de cascada” porque una vez que se activa el primer factor que la inicia, se activa el segundo y así sucesivamente hasta la activación del último factor que interviene en el proceso teniendo como resultado final la formación de la fibrina.

La cascada de coagulación puede ser activada por dos mecanismos diferentes:

El mecanismo Intrínseco (lento) iniciado por el factor Hageman XII, y la liberación de tromboplastina que es producida por la desintegración de las plaquetas; y el mecanismo Extrínseco (rápido), donde los tejidos lesionados liberan la tromboplastina tisular y el factor III, este mecanismo es el más comúnmente usado por el organismo.

Mecanismo Extrínseco.

Se inicia cuando un vaso sanguíneo sufre una rotura y los tejidos lesionados liberan un complejo proteínico llamado tromboplastina tisular que al reaccionar con los factores IV, V, VII y Xd e la coagulación dan lugar a la tromboplastina extrínseca. Este fenómeno corresponde a la etapa 1 del mecanismo extrínseco, en la etapa 2 la protrombina se transforma en trombina en presencia de tromboplastina y los factores de coagulación IV, V, VII y X, por último en la etapa 3 (vía común) en fibrinógeno (soluble) se transforma en fibrina (insoluble) por acción de la trombinaformada en la etapa 2 y en presencia de los factores IV y XIII.

Mecanismo Intrínseco.

También se inicia con la rotura de un vaso que origina un cambio en la polaridad del endotelio produciendo que las plaquetas se adhieran al área lesionada, en condiciones normales el endotelio y las plaquetas poseen carga (-), por lo tanto, se repelen y no se adhieren al vaso.

La agrupación masiva de las plaquetas provoca la desintegración de la mayor parte de ellas produciendo la liberación de los factores de liberación plaquetarios.

En la etapa 1 del mecanismo intrínseco intervienen 4 factores de coagulación plaquetaria (Pf1, Pf2,Pf3,Pf4) que reaccionan con 7 de los factores de coagulación (IV, V, VIII,IX, X, XI, XII) y origina la tromboplastina intrínseca, en la etapa 2 la protrombina se transforma en trombina por acción de la tromboplastina intrínseca y los factores de coagulación IV, V, VII y X.

La etapa final o vía común es la producción de la fibrina a partir del fibrinógeno por medio de la acción de la trombina; ésta además de activar el fibrinógeno en fibrina, origina un aumento en el número de plaquetas que se autoadhieren, desintegran y liberan cantidades altas de factores de coagulación plaquetario. Esta secuencia es cíclica y garantiza la formación del coágulo, una vez que éste obstruye la lesión se detiene la hemorragia y se inicia la reparación del vaso, pues los fibroblastos forman tejido colectivo y nuevas células endoteliales cubren el área lesionada.

Fibroblasto y sus compenentes necesarios para la cicatrización de las herídas

En condiciones normales la coagulación implica dos fenómenos: la retracción del coágulo y la fibrinólisis. La retracción es la consolidación del coágulo de fibrina, los filamentos de ésta se contraen disminuyendo la lesión (durante la retracción se separa el suero pero los elementos formes de la sangre permanecen unidos ), la retracción normal del coágulo depende de la cifra normal de plaquetas. La fibrinólisis es la disolución del coágulo una vez que ha cumplido su función que es detener la hemorragia, en los inicios de la coagulación los tejidos lesionados liberan enzimas que transforman el plasminógeno (inactivo) en plasmina (activa), la cual se encarga dedisolver la fibrina del coágulo.

Coágulo de fibrina o coágulo sanguíneo

En la formación del coágulo es indispensable la presencia de calcio (Ca++) y vitamina K, esta última juega un papel importante para la síntesis de protrombina.

Las alteraciones de la hemostasia pueden manifestarse en cavidad oral y representan un riesgo importante durante las intervenciones de exodoncia y parodoncia; por lo tanto es importante conocer las pruebas de valoración hemostásica, los parámetros normales de éstas y desarrollar el criterio adecuado para interpretarlos con el objetivo de facilitar el manejo del paciente en el consultorio dental.

Las pruebas de laboratorio que efectuaremos en esta práctica son: tiempo de sangrado, tiempo de coagulación, prueba de fragilidad capilar (torniquete) y recuento de plaquetas; sin embargo existen otras pruebas cuantitativamente más confiables que requieren de reactivos y equipos especiales y que son las más comúnmente usadas para la valoración preoperatoria de un paciente, sus nombres y cifras normales se citan a continuación.

Según la fase donde se encuentre alguna falla en el proceso hemostásico las enfermedades hemorrágicas pueden ser: púrpuras angiopáticas, debidas a lesiones capilares; púrpuras trombopénicas, producidas por carencia o deficiencias en la calidad y número de plaquetas y coagulopatías, debidas a trastornoso ausencia de los diferentes factores de la coagulación los cuales a su vez pueden ser hereditarios (ejemplo, hemofilia A, cuyos pacientes presentan deficiencia en el factor VIII y hemofilia B, donde la deficiencia se presenta en el factor IX) , o adquiridos que pueden presentarse en pacientes con enfermedades hepáticas debido a que las proteinas y factores de coagulación son sintetizados en el parénquima hepático, por lo tanto puede haber deficiencia en los factores VII, IX, X y protrombina.

La administración prolongada de antibióticos afecta también la bioquímica de conversión de protrombina a trombina al suprimir los microorganismos productores de vitamina K con la consecuente alteración de los procesos hemostásicos.

Trombocitósis Consiste en una elevación pasajera del número de plaquetas superior a 500,000/mm, entre las causas más frecuentes de la trombocitósis están las intervenciones quirúrgicas, fracturas óseas e infecciones agudas y crónicas.

Trombocitósis

Trombocitemias Son hiperplaquetosis duraderas asociadas a procesos proliferativos malignos de la sangre tales como policitemia, leucosis, esplenomegalia mieloide. Su naturaleza etiológica es generalmente de orden neoplásico mieloproliferativo en donde las cifras de plaquetas son del orden de 600,000 a 14,000,000/ mm.

Trombocitopenia Es la disminución de las plaquetas por abajo de 100,000 /mm debido a un defecto en su producción o a la presencia de alteraciones funcionales en ellas.

Trombocitopenia

Uno de los trastornos más importantes en la hemostasia es la púrpura trombocitopénica, que se caracteriza por la disminución en la cifra normal de las plaquetas debido a la ausencia del factor madurador de los megacariocitos sus causas pueden ser de naturaleza primaria o idiopática (etiología desconocida) y secundaria producida por factores infecciosos (bacterias o virus), factores de insuficiencia renal o hepática y factores alérgicos (venenos de víbora o dermatitis).

Sus características clínicas son: hemorragia gingival espontánea, petequias en mucosa bucal (paladar), epitaxis, hematuria y hemorragia gastrointestinal. Los hallazgos de laboratorio para la púrpura trombocitopénica son: trombocitopenia (número de plaquetas inferior a 60000/mm), tiempo de sangrado prolongado (1 hora), tiempo de coagulación normal pero con falla en la retracción (endurecimiento) del coágulo, fragilidad capilar aumentada (prueba de torniquete positiva +++) y recuento de eritrocitos y leucocitos normal.

Pruebas de valoración hemostásica/ Sesión práctica 

Sesión práctica: biometría hemática - fórmula blanca

Objetivos

Realizar las técnicas correspondientes a tiempo de coagulación, tiempo de sangrado y prueba de torniquete.

Comparar los resultados de laboratorio con los valores normales y efectuar la interpretación de los valores obtenidos.

Los alumnos integrarán equipos de dos y en ambos efecturán las siguientes pruebas:

Es esta prueba se mide la eficacioa de las fases vascular y plaquetaria.

1. Realice la asepsia del lóbulo de la oreja con una torunda con alcohol, durante 10 segundos y dejar secar. 

2. Con una lanceta estéril practique una punción de sola intención y que penetre la punta de la lanceta hasta el tope. (Realizar punción en una zona donde no existan venas visibles o lesiones superficiales)

3. Cada 10 segundos con papel filtro estéril seque las gotas de sangre, sin tocar la piel y girando el papel. Esta operación realícela hasta que deje de salir sangre. 

4. Cuente el número de manchas de sangre en el papel filtro y multiplique por 10 segundos para conocer el tiempo de sangrado.

Refleja alteraciones en la fase vascular y plaquetaria de la hemostasia

1. Dibuje por la cara interna del antebrazo un círculo de 2.5 cm de diámetro cuyo centro se encuentre aproximadamente a 4 cm del pliegue del codo. 

2. Coloque el brazalete del esfigmomanómetro en el brazo del paciente e insufle hasta 80 mm de Hg, manténgalo a esta presión durante 5 minutos.  

3. Retire el esigmomanómetro y después de 5 minutos cuente el número de petequias localizadas en el interior del círculo previamente trazado. 

Evalúa la vía intrínseca de la coagulación, es poco sensible se sugiere en su lugar: tiempo de tromboplastina parcial activada y tiempo de protrombina. 

1. Realice la antisepsia del borde interno del dedo pulgar de la mano izquierda, con alcohol y deje secar. 

2. Puncione con una lanceta, de una sola intención, clavando toda la punta e inicie el registro del tiempo con el cronómetro. Puncionar el dedo anular. 

3. Descarte la primera gota y las siguientes absórbalas con los tubos capilares, colocándolos horizontalmente para no capturar burbujas. Llene los 2 tubos.

4. Después de 1 minuto corte pequeños fragmentos de los tubos capilares y separe los bordes con cuidado para observar si se forma un hilo de sangre (fibrina) entre ambos extremos, seguir rompiendo los tubos capilares cada 15 segundos y detener el cronómetro en el momento de observar el coágulo. 

Pruebas de valoración hemostásica/ Bibliografía 

 Bibliografía

1.- Báez J., Hematología Clínica., 4a. Ed., Ed. Méndez Oteo., México. 1973

2.- Benington., Laboratorio en el Diagnóstico Clínico., Ed. La Prensa Médica Mexicana., México.1976

3.- Figueroa W.G.. Hematology Wiley, New York 1989

4.- Gilberto A., Interpretación Diagnóstica del Laboratorio Clínico., Nueva Editorial Interamericana., México. 1978

5.- Hilman Roberts, et.al., Manual de Hematología.,3a. ed., Ed. El Manual Moderno., México. 1980

6.- Kaushansky, K., Prchal, J., Burns, L., Lichtman, M., Levi, M. & Linch, D. Williams Hematology, McGrawHill, 2014

7.- Linch., Métodos de Laboratorio., Ed Interamericana., México. 1976

8.- Novales  J. Sistema Linfohemático ENEPI UNAM, 1989

Citología exfoliativa

 10. Citología exfoliativa 

Introducción

La citología exfoliativa es el estudio morfológico de las células que se descaman de los epitelios.

Schwan y Sleyden desarrollaron la llamada teoría celular en 1838, en donde señalan que todo ser vivo está compuesto por células, Hooke demuestra la presencia del núcleo y su importancia en la vida celular. Estos conocimientos fueron básicos para el desarrollo de la citología.

La citología exfoliativa como método de investigación, se inicia a partir de los trabajos de Stockard y Papanicolaou en 1917, con estudios realizados de exudados vaginales de ratas que dieron lugar al diagnóstico precoz del cáncer cervicouterino.

Se le ha empleado en la cavidad bucal, para la evaluación de lesiones de la mucosa oral como infecciones, cáncer, inflación, etc. Causadas por tabaquismo, alcoholismo crónico y mordida traumática. La aplicación en la boca fue iniciada por Montgomery en 1958 en enfermedades parodontales y en 1960 Camilleri y Lange la emplean para estudios de queratinización en células gingivales.

Es importante resaltar que para obtener éxito en el diagnóstico, es necesaria la colaboración entre el clínico y el patólogo, el primero realizando el diagnóstico clínico y el segundo apoyando dicho diagnóstico con el estudio citológico o histopatológico.

El clínico sospechará de alguna lesión como cancerosa cuando observe irritación crónica localizada que no cede ante la terapéutica establecida, lesiones sangrantes, con bordes indurados e irregulares, crecimiento rápido de la lesión, alteraciones ganglionares, ataque al estado general del paciente. 

Carcinoma de células escamosas en encía y piso de boca

Lesión crónica ulcerativa.

Cuando se sospecha de una lesión, el estudio al que se puede recurrir en primera instancia es la citología exfoliativa, aunque también es posible realizar una biopsia.

La Biopsia es un procedimiento quirúrgico, que consiste en escindir en un individuo un fragmento de tejido normal o patológico, para investigar su naturaleza histológica. El médico especialista para realizar estos estudios es el patólogo.

La Patología es la rama de la medicina que se encarga del estudio de las enfermedades, su origen, los síntomas y las alteraciones anatomopatológicas que resultan. La palabra se deriva del griego pathos, enfermedad y logos, estudio.

El laboratorio de anatomía patológica es atendido por un médico responsable especialista en patología, apoyado por el equipo técnico, en algunas ocasiones pueden colaborar en el mismo laboratorio, otro especialista, generalmente otro médico o técnico que se encarga del estudio citológico.

El laboratorio de histopatología apoya el diagnóstico clínico con estudios de citología exfoliativa y biopsia, principalmente en el diagnóstico de cáncer, enfermedades degenerativas e infecciosas.

Tanto el patólogo como el citólogo se apoyan en el estudio microscópico del tejido o células previamente procesados y teñidos por el técnico para establecer el diagnóstico.

Tanto el citólogo como el patólogo observan en las células de descamación alteraciones nucleares y citoplásmicas, como alteraciones en la relación núcleo-citoplasma, y aberraciones nucleares como hipercromatismo y alteraciones en la forma del núcleo. Estos cambios se denominan displasias y son diferenciaciones anormales de los epitelios.

El gráfico representa los cambios nucleares y citoplásmicos displásicos.

* Reportes clase III, IV y V siempre deben de ir seguidos de biopsia de la lesión.

Existen otras clasificaciones como: negativo (clase I), sospecho (clase II) y positivo(clase III).  Otra es: Negativo (clase I), displasia (clase II), sospechoso (clase III) y positivo.  Por lo que se recomienda establecer contacto con el patólogo o citólogo para conocer la clasificación que está empleando para su reporte.

Papanicolaou positivo V

Pérdida de la relación núcleo citoplasma.

Citología exfoliativa/ Usos de la citología exfoliativa en odontología  

 Usos de la citología exfoliativa en odontología

Diagnóstico de enfermedades no neoplásicas, caracterizadas por modificaciones en la morfología celular. Por ejemplo, en procesos infecciosos que presentan inclusiones en el citoplasma (herpes, pénfigo, candidiasis, amibiasis, etc.).

Diagnóstico de lesiones preneoplásicas y neoplásicas en todos aquellos en que la descamación celular esta al alcance del clínico tal es en el caso de la mucosa oral, nasofaringe y bucofaringe. (fig. 6).

Control por estudios citológicos seriados en displasias orales. Estudio de la cromatina sexual por preparaciones citológicas a partir de la mucosa oral.

Diagnóstico de lesiones inflamatorias y neoplásicas de glándulas salivales a través de un frotis de sedimentación de la saliva. 

Boca que muestra leucoplásia.

Citología exfoliativa/ Técnica citológica  

 Técnica citológica 

Resumen de historia clínica.

Obtención de la muestra:

El método de obtención de la muestra se basa en el estudio de las células que se desprenden de los estratos tisulares de los epitelios, mezclados con otros elementos como sangre, saliva, moco, etc.

Lo accesible de la boca para el clínico la hace ideal para el diagnóstico de lesiones de diferente naturaleza benignas o malignas. 

Lesión ulcerativa crónica en encía. (sospechosa)

Recolección del material: el órgano en estudio debe estar en condiciones fisiológicas, sin lavar, sin medicamentos locales, sin manipulación, si no se puede cumplir estos requisitos se debe señalar en la solicitud.

Toma de la muestra y manejo de la misma, si las lesiones son de tipo ulceroso, basta con raspar con abate lenguas con suavidad para evitar el sangrado, si la lesión no es ulcerosa el raspado es vigorosa hasta obtener un liquido lechoso, en ambos casos se practica un frotis homogéneo y delgado sobre la superficie de un portaobjetos seco y limpio.

La portaobjetos con la muestra se introduce en un frasco conteniendo alcohol etílico de 96º o se rocía con líquido fijador a base de polietilenglicol o isopropil (spray Get Set normal), si se usa alcohol el portaobjetos debe permanecer por lo menos 10 minutos. El frasco debe estar etiquetado con los datos del paciente y del médico, acompañado de la solicitud debidamente requisitada.

Si las lesiones son de tipo tumoral cubierto de epitelio íntegro, vesicular o ampuloso se realiza punción y con el producto obtenido se hace un frotis.

Toma de la muestra para el frotis.

Citología exfoliativa/ Sesión práctica 

 Sesión práctica: citología exfoliativa

Objetivos:

Que el alumno conozca, maneje y analice las indicaciones de la citología exfoliativa aplicada a la cavidad oral. 

Que el alumno describa las ventajas y desventajas de la citología exfoliativa en relación con las biopcias. 

Que el alumno describa y realice la técnica de obtención, manejo, preservación y envío de fotis para análisis citológico. 

Que el alumno interprete los resultados de un estudio citológico de acuerdo con la clasificación de Papanicolaou. 

Que el alumno valore adecuadamente, en la mayoría de los casos, el estado de la mucosa oral en condiciones de salud y enfermedades microbianas y parasitarias.

Los equipos se agrupan en parejas, cada pareja tiene un número asignado. 

Cada miembro de la pareja elabora una historia clínica. 

La boca debe estar en condiciones fisiológicas, sin lavar, sin medicamentos locales, sin manipulación. BOCA NORMAL. 

Toma de la muestra y manejo de la misma: 

Si existe alguna lesion de tipo ulceroso, raspar con abatelenguas con suavidad para evitar el sangrado. 

Si no hay lesión, realizar un raspado vigoroso con el abatelenguas en la mucosa del carrillo, hasta obtener un líquido lechoso, en ambos casos se practica un frotis homogéneo y delgado sobre la superficie de un portaobjetos seco y limpio.

Los portaobjetos con la muestra se introducen en un frasco conteniendo alcohol etílico de 96° o se rocía con líquido fijador a base de polietilenglicol o isopropil (spray Get Set normal), si se usa alcohol el portaobjetos debe permanecer por lo menos 10 minutos. 

El frasco debe estar etiquetado con los datos del paciente, del médico y fecha de obtención de la muestra, acompañado de la solicitud debidamente requisitada. 

El alumno procederá a realizar la tinción del frotis obtenido con la técnica de H. E.

Identificar cada laminilla anotando el número de equipo y pareja en un externo de la laminilla con el lápiz diamante. 

Colocar las laminillas en la canastilla porta laminillas. 

Introducir las canastillas a las cajas hematoxilina de Harris 1 minuto. 

Lavar con agua corriente. 

Introducir las canastillas a las cajas con eosina 15 segundos. 

Paso rápido por alcohol de 96°. 

Paso rápido por alcohol absoluto.

Introducir las canastillas a las cajas con xilol 1 minuto. 

Dejar secar y cubrir con portaobjetos y resina.

Observar al microscopio y describir los elementos observados, realizar un esquema detallado de lo observado.  

Anotar y discutir en equipos los resultados 

Análisis

Da clic en la imagen para acceder a una pizarra, donde podrás escribir el análisis de la práctica utilizando la entrada de texto, escribir con el dedo, un lápiz especial o añadir imágenes.

Conclusiones 

Da clic en la imagen para acceder a una pizarra, en la cual podrás anotar las conclusiones de la práctica o añadir imágenes.

Pruebas de valoración hemostásica/ Bibliografía 

 Bibliografía

1.- Editorial Procesos para el diagnóstico clínico PO Vol. 18 No.7, 1989

2.- Fentanes, E., Guevara, E.. Citología Clínica. ED. Prensa Médica Mexicana, México, 1980

3. Krupp A. y Cols. Manual de Diagnóstico Clínico y de Laboratorio 7a ED. Ed. el Manual Moderno México, 1985

4. Luna, L.  Manual of Staining Methods of the Armed Forces Institute of Pathology, Mc Graw Hiil, New York, 1968

5.- Pérez, R., Patología Molecular, subcelular, y celular., Ed. Prensa médica Mexicana. México,1980.

6.- Facultad de Odontología UNAM. Solicitud de estudio histopatológico. Servicio de Diagnóstico en patología bucal. (s.f) Recuperado de: http://www.odonto.unam.mx/es/servicio-de-diagnostico-histopatologico-0